Molekylær diagnose, hvad det er, hvad det er for, og hvordan det gøres
Molekylær diagnose svarer til et sæt molekylære teknikker, der sigter mod at identificere ændringer i DNA, der f.eks. Kan være tegn på genetiske sygdomme eller kræft. Derudover anvendes molekylære teknikker i vid udstrækning til identifikation og bekræftelse af infektionssygdomme, da de repræsenterer en hurtigere og mere nøjagtig diagnostisk metode.
Molekylær diagnose er dyr, og derfor anmodes der ikke særlig ofte om læger, men den giver nøjagtige resultater med hensyn til forekomsten af ændringen, måden den kan forstyrre organismenes funktion og patientens reaktion på behandling.
Hvad er det til?
Molekylær diagnose kan udføres med flere mål, hvoraf de vigtigste er:
- Identifikation af mutationer relateret til leukæmi, såsom identifikation af BCR-ABL-translokation, som er karakteristisk for kronisk myeloide leukæmi (CML);
- Karakteristiske mutationer af hæmatologiske sygdomme, såsom arvelig hæmochromatose, polycythemia vera, essentiel thrombocythemia og thrombophilia, for eksempel.
- Molekylære ændringer, der indikerer forekomsten af kræft, såsom kolorektal, lunge-, bryst- og hjernekræft, for eksempel;
- Diagnose af infektionssygdomme, såsom hepatitis, urethritis, toxoplasmosis, leishmaniasis osv., ud over HPV-virus.
Molekylær diagnose er, selv om den betragtes som dyr i sammenligning med andre diagnostiske teknikker, mere præcis, da den er i stand til at informere ændringen om en bestemt sygdom og graden af indflydelse af denne ændring i kroppen og således hjælpe personens behandling..
Ud over at blive brugt til diagnose af flere sygdomme, anvendes molekylære teknikker også til at vurdere responsen på behandling, især hos mennesker med kræft, hvilket er en af de mest effektive metoder til at indikere sygdomsprogression og tilbagefald.
Sådan gøres det
Den molekylære diagnose kan udføres med en hvilken som helst prøve, hvor lægen anmoder om den, der bedst kan give information om patientens tilstand, som kan være urin, spyt eller i de fleste tilfælde blod. Fasten eller anden forberedelse er ikke nødvendig til eksamen.
Prøven indsamles og sendes til laboratoriet sammen med lægens vejledning, der informerer om den undersøgelse eller type forskning, der skal udføres. Den udførte molekylteknik afhænger af den ønskede undersøgelse og involverer en række nøjagtige procedurer, der sigter mod at identificere tilstedeværelsen eller fraværet af den ændring, som lægen anmoder om..
Normalt bruges kun en lille mængde sendt prøve, mens resten gemmes, så om nødvendigt gentages prøven.
Se, hvad der er de vigtigste molekylære teknikker
PCR
den PCR, forkortelse til Polymerase Chain Reaction eller Polymerasekædereaktion, er en molekylær teknik, der består af amplificering af et fragment af genetisk materiale, hvad enten det er DNA eller RNA, for at identificere mutationer og således hjælpe med diagnosen sygdomme.
Denne teknik er fremstillet af ekstraktion og oprensning af det genetiske materiale, der derefter anbringes i en blanding, hvor en af komponenterne er et restriktionsenzym, der varierer afhængigt af den anmodede undersøgelse, og hvis funktion er at skære materialet i fragmenter så den mulige genetiske ændring kan identificeres. Blandingen anbringes i en termocykler, som er en anordning, der fungerer gennem temperaturvariationen, der er angivet af fagmanden i henhold til undersøgelsen, og således tillader amplificering af det genetiske fragment. I tilfælde af konventionel PCR udsættes PCR-produktet efter amplificering elektroforese, der er en molekylær teknik baseret på vægten og størrelsen af fragmenterne, det vil sige i henhold til disse karakteristika, der genereres et båndmønster, hvis analyse er foretaget baseret på det positive kontrolbånd, det vil sige det kendte bånd der svarer til den genetiske ændring.
den PCR i realtid, også kaldet qPCR, det er en type kvantitativ PCR, dvs. ud over at identificere den genetiske ændring er det i stand til at give information om genekspression, det vil sige, hvor meget det ændrede gen udtrykkes i organismen og således være i stand til at være bruges til at hjælpe diagnosen og overvåge behandlingen. PCR i realtid kræver ikke elektroforese, hele processen med at forstærke og analysere genetisk materiale udføres af en anordning, og resultatet fortolkes af en uddannet sundhedspersonal.
sekventering
den sekventering er en molekylær teknik, der består af bestemmelse af sekvensen af DNA-nukleotider, som er de dannende enheder af genetisk materiale. Sekventering sker fra en reaktion svarende til PCR, men i amplifikationsblandingen tilsættes modificerede nukleotider ved tilsætning af fluorokromer, som når materialet amplificeres, de modificerede nukleotider inkorporeres i DNA'et og genererer adskillige fragmenter, som svarer til sekventeringsproduktet.
Reaktionsproduktet anbringes i en anordning kaldet DNA-sequencer, hvor fluorokromerne, når fragmenterne nås ved hjælp af udstyrets laser, exciteres og udsender fluorescens, som er indikeret af udstyret ved hjælp af toppe, med hver top svarende til et nukleotid. Efter afslutningen af reaktionen vil udstyret informere DNA-sekvensen og således være i stand til at hjælpe lægen med diagnosen genetiske sygdomme..
